从简化工作流程到常规故障排除，探索 xMAP® 微球的技术优势与奥秘。
是否好奇驱动生命科学检测进程的核心技术？探索我们微球产品的独特性能，其增强并简化工作流程的能力，正彻底革新多分析物检测方式。
高效多分析物检测简化的关键在于 xMAP 微球。xMAP® 微球使我们的技术成为独一无二的平台。何为 xMAP® 微球？其有两种形态：
- MicroPlex® 微球是直径 5.6 µm 的均一聚苯乙烯颗粒。
- MagPlex® 微球直径 6.5 µm。 MagPlex 微球由制造 MicroPlex 微球的标准聚苯乙烯 微球衍生而来，经铁涂层处理，具备超顺磁性粒子特性。
两种微球表面均包被有羧基，可使蛋白质或胺修饰寡核苷酸偶联于微球，用于开发不同蛋白质组学或核酸应用。微球的小尺寸与密度确保其保持悬浮状态，实现与样本分析物的快速充分反应。
用 xMAP® 微球优化多重检测流程
MicroPlex 微球内部标记两种染料的不同浓度，使 Luminex 能制备 100 种不同颜色的荧光编码微球。
MagPlex 微球内部标记多达三种染料的不同浓度，使 Luminex 能制备 500 种色标的微球组合。MagPlex 微球的超顺磁性使其在磁场中快速移动，撤除磁场后易重悬。这省去了检测开发与处理过程中的离心或过滤步骤。
两类微球的多重检测能力，可开发出样本试剂用量更少、数据产出更快更精准的检测方案。但需注意，尽管微球稳定可靠，使用时仍需谨慎。
保护微球免受累积光暴露
微球在含两至三种荧光染料的有机溶液中染色。微球在有机溶液中会发生溶胀，使染料扩散入内。 洗涤后微球收缩至原尺寸，染料被截留其中。此工艺使 Luminex 能制备 500 种独特颜色的荧光编码微球，每批次分配 1 到 500 编号以标识编码微球（即微球 ID）。当 xMAP 系统红色激光激发染料时，每种微球可通过其染料组合的特异发射峰识别。所有仪器均可识别 100 种 MicroPlex 微球，但仅 FLEXMAP 3D® 与 xMAP INTELLIFLEX® 能读取全部 500 个区域。
用于微球识别的三种染料具有光敏感性，累积强光暴露 4-6 小时可能导致误分类，使微球在分布图上偏离指定区域。内部染料的光漂白不可逆，发生此情况必须弃用微球。 因此，在储存与检测孵育过程中，务必保护 xMAP® 微球免受长时间光暴露。
微球图谱与双峰甄别器如何优化常规故障排查流程
使用 xMAP® 流式仪器时，微球在分布图区域的呈现状态可揭示检测运行状况。例如：若微球在其分配区域内呈左下至右上的对角条纹（参见下文症状列表），可能是微球聚集（结块）征兆。 聚集效应亦见于双峰甄别器 (DD) 图谱——上门右侧出现峰形。
微球结块成因包括：偶联过程中微球交联（高疏水性分子粘附微球）、使用前未充分涡旋震荡和/或超声处理，或需在微球储存与检测缓冲液中添加去污剂及封闭剂。
若遇微球分类问题（未能正确识别检测中的微球），建议：(1) 确认软件方案中选择正确微球区域；及 (2) 验证系统校准/校验成功以确保正常运行。
可使用 xMAP 校验微球确认系统校准状态。当试剂盒结果异常时，确保系统通过校准和校验有助于判断是否为硬件问题。还可在检测微球混合液中加入 MagPlex® 监测微球（具超顺磁性的聚苯乙烯微球），其有助于监控检测与仪器性能。这些微球通过中位荧光强度 (MFI) 和微球分类数据，可协助排查异常结果源于检测问题还是仪器故障。以下补充案例与技巧适用于 Luminex® 200™、FLEXMAP 3D® 及 xMAP INTELLIFLEX® 仪器的故障排除：
采集问题排查指南
请注意，尽管 xPONENT® 和 xMAP INTELLIFLEX® 软件中的图像显示可能存在差异，其呈现原理及对应的问题解决方案本质相同。
| 症状 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
xMAP® 微球分类正常。  | 无异常。 | 无需处理 |
xMAP® 微球分类值过高。  | 可能使用光漂白校准微球。 | 如果问题由校准微球引起，请更换新批次校准微球。务必避光保存微球防止光漂白。 |
xMAP® 微球进入右下区域。  | 可能使用光漂白 xMAP® 微球。 | 更换新批次微球。务必避光保存微球防止光漂白。 |
微球分布散乱。  | 系统存在气泡。 | 确认样本针高度。运行三次灌注命令、两次酒精冲洗命令，然后运行三次蒸馏水清洗命令。 |
微球分布散乱。  | 鞘液耗尽。 | 确保鞘液容器有足量液体。执行系统灌注直至排尽气泡。 |
微球呈长对角线分布。  | xMAP® 微球发生聚集。 | 在检测缓冲液中添加去污剂。例如：补加 0.1%-0.2% Tween-20、Triton X100 或 SDS。 |
微球呈箭头状分布。  | 检测缓冲液或溶剂不兼容。 | 联系 Luminex 技术支持获取不兼容溶剂列表。若所用溶剂在列，立即更换。 |
微球呈箭头状分布。  | 使用不兼容鞘液。 | xMAP® 流式仪器仅限使用 xMAP® Sheath Fluid PLUS 鞘液。其他液体可能造成损坏并使保修失效。 |
本文内容不适用于 MAGPIX® 系统
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About the Author
Stephen Angeloni, PhD, Sr. Field Application Scientist, Luminex
Dr. Angeloni received his PhD in Biochemistry from Virginia Polytechnic Inst. and State University. While he has been at Luminex for 12 years, before joining Luminex he had over 30 years of research and industry experience with the development of a wide variety of biochemical, genetic, proteomic, immunology, microscopy, cellular and molecular biology assays. These technologies were applied to studying genetic and environmental factors contributing to the susceptibility or resistance to a number of infectious and non-infectious diseases. This includes studies on disease mechanisms or treatments in the areas of endocrinology, cancer, obesity, diabetes and the development of DNA vaccines. These research efforts employed cellular, mouse and non-human primate model systems. This diversified experience has been applied to developing and supporting commercial applications for cellular genetic engineering, bioinformatic data analysis as well the development of genomic and proteomic assay platforms for research and diagnostics. This experience is now available for supporting the development of several applications on the Luminex xMAP platform.